1、SDS裂解液是一种比较强烈的细胞组织裂解液,常用于组织细胞中难溶蛋白的裂解。
2、本产品具有有强烈的蛋白变性作用,不能用于非变性蛋白方面的研究。
3、本产品裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、ChIP(染色质免疫共沉淀,chromatin immunoprecipitation)等。
4、由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本产品裂解得到样品的蛋白浓度。建议使用晶彩生物生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。
产品编号 |
JC-PL004 |
JC-PL005 |
JC-PL006 |
产品名称 |
|||
裂解强度 |
温和 |
强 |
温和 |
对膜蛋白的提取 |
一般 |
很好 |
一般 |
对胞浆蛋白的提取 |
很好 |
很好 |
很好 |
对核蛋白的提取 |
较好 |
很好 |
较好 |
胞浆磷酸化蛋白提取 |
很好 |
很好 |
很好 |
细胞核转录因子提取 |
很好 |
很好 |
很好 |
主要用途 |
WB, IP, co-IP |
WB, co-IP |
WB, IP ,co-IP |
原理:
阴离子去垢剂SDS促进细胞膜的崩解,特别适用于膜蛋白或者细胞骨架蛋白的裂解。
操作步骤:
对于培养细胞样品:
1、融解SDS裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
2、对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150—250ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。
对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。
3、充分裂解后,10000-14000rpm离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。
裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150ul裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200ul或250ul。如果用于ChIP,建议6孔板每孔细胞至少加入200ul裂解液。
对于组织样品:
1、把组织剪切成细小的碎片。
2、融解SDS裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
3、按照每20毫克组织加入150—250ul裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量);
4、用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟;
5、充分裂解后,10000-14000rpm离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作;
6、如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
可以制备样品数:
样品种类 |
样品来源 |
收获细胞数 |
RIPA用量 |
可制备样品数 |
细胞 |
6孔板 |
2.5*106 |
150-250ul |
400-600 |
60mm培养板 |
5.2*106 |
300-500ul |
200-300 |
|
90mm培养板 |
12.2*106 |
500-1000ul |
100-200 |
|
25cm2培养瓶 |
5*106 |
300-500ul |
200-300 |
|
75cm2培养瓶 |
2*107 |
1000-2000ul |
50-100 |
|
组织 |
20mg组织块 |
|
150-250ul |
400-600 |