NP-40裂解液-蛋白提取-龙八国龙八

货号：PL004

厂家：晶彩

1、NP-40裂解液是一种比较温和的细胞组织裂解液，可以用于常规的Western、IP和co-IP等实验蛋白样品的制备。

2、用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品，含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定蛋白浓度。建议使用晶彩生物生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。

原理：

NP40作为非离子型去垢剂可以促进细胞膜的崩解，是一种温和的细胞组织裂解液。

操作步骤：

对于培养细胞样品：

1、融解NP-40裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM；

2、对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解；

对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解；

充分裂解后，10000-14000rpm离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150ul裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200ul或250ul。

对于组织样品：

1、把组织剪切成细小的碎片；

2、融解NP-40裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM；

3、按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)；

4、用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解；

5、充分裂解后，10000-14000rpm离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作；

6、如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

可以制备样品数：